Diabetologia：激活但动态受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出有现去甲自身抗形体到经常出有现1改型肝炎外科症状的实质性不下在婴幼儿一时期就有很好的描绘，多个去甲自身抗形体阳性的婴幼儿之中有70%在血清转换后10将近患上肝炎，而随访15年的婴幼儿这一比重增高到84%。相对来说之下，占去外科1改型肝炎一半以上的改型1改型肝炎的发病机制还没有得到充分的学忍术研究。

愈来愈多的人开始使用已确定系统来假定1改型肝炎的实质性：性状在经常出有现多种去甲自身抗形体时带入第1先决条件，经常出有现血糖出现异常时带入第2先决条件，经常出有现症状时带入第3先决条件。一些多发去甲自身抗形体阳性的性状，在1期和2期，实质性极快，并工业发展为发病的1改型肝炎。我们此前描绘了一两组在首次检测到多种去甲自身抗形体样品后至少10年无肝炎的变慢实质性者，这两组症状人数少，但基本特征格外为清楚。随后，我们发现去甲自身抗原特异性CD8+T肝细胞反理应在实质性很慢的症状之中基本不发挥作用，但在近期发病和长期发挥作用的肝炎症状之中很较易检测到。这可能说明了，与实质性症状相对来说，这些症状自身免疫反理应的可调强化。

早期学忍术研究说明了，尽管可调性T肝细胞(Treg)需求量正常，但肝炎症状发挥作用一些新功能缺陷，其之中包括对IL-2的反理应并能提高。此外，肝炎症状之中的效理应CD4+T肝细胞可能对可调格外为重要抵抗性，表现为效理应T肝细胞的消除消退，自然现象产生的Treg和形体外产生的诱发Treg，以及抗原经历的CD4+T肝细胞之中IL-2反理应消退。本学忍术研究的目的是描绘了CD4+可调性T肝细胞(Treg)在这群人极很慢实质性者之中的基本特征，他们的平均比不下为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX学忍术研究是一项以人群为基础的纵向学忍术研究，在21岁请注意确诊的症状亲属之中检查1改型肝炎的危险心理因素。我们此前描绘了长期很慢实质性者的基本特征，他们维持多重去甲自身抗形体阳性超过10年，但没有经常出有现肝炎的外科症状，慢性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名继续维持无肝炎并想提供者大量血液样品的很慢实质性者纳入T和B肝细胞新功能比对。在目前的学忍术研究之中，8名慢实质性者(SP两组)，之中位比不下43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此间的去甲自身抗形体阳性。所有的参与者都属于1改型肝炎实质性的1期，尽管一些人随后夺去了去甲自身抗形体对某些抗原的阳性反理应，然而，一名症状已经属于2期至少6年，但没有经常出有现外科症状，一名症状被确诊为肝炎，该受试者72岁，在收集实验样品时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据比对之中对该ADP顺利完成了基本上评估。分离外周血单个核肝细胞(PBMCs)，采用多变量流式肝细胞忍术和T肝细胞消除试验评估ADP之中Treg的频不下、表改型和新功能。使用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、并不一定和转回)顺利完成无全权负责聚类比对，评估Treg表改型。

结果：与健康ADP相对来说，来自慢实质性形体的潜意识CD4+T肝细胞的全权负责聚类推测，激活的潜意识CD4+ Treg频不下增高，与低剂量诱发的TNFR相关蛋白(GITR)解读增高有关。一名HbA1c增大的症状与实质性很慢者和匹配的相符合两组相对来说，Treg谱有所不同。新功能比对说明了，与健康ADP相对来说，来自很慢实质性形体的Treg内源性的CD4+效理应T肝细胞消除明显受损。表现为对效理应CD4+T肝细胞CD25和CD134解读的消除增高。

布1 深入的表改型比对推测，CD4+Treg亚改型在慢实质性队列之中增高。由FlowSOM降解的Treg楼内，两组织起来在来自所有ADP的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标有物解读鉴定出有10个元簇:潜意识T肝细胞_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T肝细胞;HLA-DR + GITR +潜意识T肝细胞;线程Treg_1;线程Treg_2;线程Treg_3;和线程Treg_4。(a)使用9个不同Treg标有降解的10个元簇的MST。每个链表亦然一个坦克部队(100个坦克部队)，格外大的元坦克部队(10个元坦克部队)在链表两组周围手工。每个链表之中的糕布坚称单个标有的解读高级别。(b)每个元聚类的热布，以推测整形体标有解读。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)降解布，以及FlowSOM辨别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对丰度为每个metacluster箱内新线布(丰度> 0.05%)确定为HD和SP两组:线程Treg_2 (e),线程Treg_3 (f),线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T肝细胞(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T肝细胞(l)。深蓝色格子亦然**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩筛选。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 使用CITRUS的预测模改型证实，Treg频不下的增高是实质性很慢的标志。分级门控(a - f)和柑橘比对(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群形体的亦然性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读顺利完成分离，模拟FlowSOM群形体。(b) HD(黑点)和SP(斑点)两组以及ADPSP 606(深蓝色)之中CD25+ cd127的频不下概要布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的箱内新线布;(c) HLA-DRloGITR−(线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线程T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度着色，箭头出彩有的簇被辨别为SP和HD队列彼此间的不同。(j)箱内新线布推测了在SP(斑点)和HD(灰点)两组之中，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相对丰度(比重)。(k)直方布推测每个簇的表改型(深蓝色)和Treg标有相对解读与背景解读(蓝色);上列，线程Treg_3;比如说一行，线程Treg_4。背景与所有其他簇之中标有的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩筛选

布3 与健康献血者相对来说，实质性很慢者潜意识treg的GITR增高。每个潜意识CD4+T肝细胞元簇(潜意识T肝细胞_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T肝细胞;HLA-DR + GITR +潜意识T肝细胞;线程Treg_2;线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个解读标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的解读热布(sp606不包括在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR解读串联，推测直方布(c)和概要布(d)。Wilcoxon配对符号秩和筛选，p< 0.07(深蓝色)所有ADP包括，p< 0.05(蓝色)ADPSP 606和匹配的HD不包括在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR解读，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)串联，推测直方布(e)和概要布(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩筛选

布4 来自很慢实质性的CD4+ treg肝细胞操控效理应CD4+T肝细胞的并能提高。SP两组用蓝色的新线和格子坚称，HD两组用黑色的新线和格子坚称，深蓝色的新线/格子坚称ADPsp606。使用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利完成分选。CD4+CD25−(理此番者)被标有为CFSE, Treg按判读的比重试样。用抗CD3 /28微珠激活肝细胞，培植3几天后顺利完成流式肝细胞忍术检测。(a-d)与CD4+理此番者相对理应的treg培植(自形体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD理此番者培植。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE消除倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除倍数。使用阳性相符合(激活的响理应肝细胞分别为treg)计算消除倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 效理应CD4+T肝细胞对很慢实质性的T肝细胞激活的消除格外敏感。SP两组用蓝色的新线和格子坚称，HD两组用黑色的新线和格子坚称，深蓝色的新线/格子坚称ADPsp606。使用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利完成分选。CD4+CD25−(理此番者)被cfsel标有，treg按判读的比重试样。用抗CD3 /28微珠激活肝细胞，培植3几天后顺利完成流式肝细胞忍术(CD25反染)和肝细胞因子比对。HD Treg与HD、SP或sp606理此番者共同培植。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE消除倍数(b)。(c,d) CD25消除倍数(c)和CD134消除倍数(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在五小之中的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出有的结论是，来自很慢实质性子的激活潜意识CD4+Treg在GITR解读之中得到了扩展和比较丰富，务实了格外进一步学忍术研究Treg在1改型肝炎风险性状之中的异质性的必要性。

原文出有处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28